Topmusicanswers
Upravte teploty žíhania, pretože vysoké koncentrácie aditív PCR alebo pomocných rozpúšťadiel oslabujú väzbu primeru na cieľ. Zvýšte množstvo DNA polymerázy alebo použite DNA polymerázy s vysokou účinnosťou.
...
- Chyby sekvencie na koncoch produktov PCR.
- Falošne pozitívna amplifikácia.
- Zdroje.
- Aké sú bežné riešenia problémov, ktoré sa môžu vyskytnúť v PCR?
- Prečo moja PCR nefunguje??
- Čo spôsobuje rozmazanie PCR?
- Čo sa stane, ak je teplota žíhania príliš vysoká?
Aké sú bežné riešenia problémov, ktoré sa môžu vyskytnúť v PCR?
Sprievodca riešením problémov s PCR
| Problém | Príčiny |
|---|---|
| Nízky alebo žiadny výnos produktu PCR | Teploty žíhania a predlžovania programu termocyklerov nie sú optimálne |
| V reakcii chýba Taq polymeráza alebo iná reakčná zložka | |
| Príliš nízka koncentrácia základného náteru | |
| Cieľová sekvencia nie je v templáte DNA |
Prečo moja PCR nefunguje??
Ak zabudnete iba jednu zložku reakcie PCR, či už ide o DNA polymerázu, priméry alebo dokonca templátovú DNA, bude to mať za následok neúspešnú reakciu. Najjednoduchším riešením je reakciu zopakovať. ... Ak ani potom produkt PCR neexistuje, je pravdepodobné, že vašej reakcii bráni niečo iné.
Čo spôsobuje rozmazanie PCR?
Kontaminácia DNA, RNA vo vzorke DNA, vysoká koncentrácia DNA v reakcii PCR môže spôsobiť rozmazanie. ... K rozmazaniu DNA zvyčajne dochádza v rastlinách v dôsledku vysokej koncentrácie templátovej DNA.
Čo sa stane, ak je teplota žíhania príliš vysoká?
Teplota žíhania bola príliš vysoká
Ak je teplota žíhania príliš vysoká, priméry sa nedokážu viazať na templát. Pravidlom je použiť teplotu žíhania, ktorá je o 5 ° C nižšia ako teplota Tm primeru.
